高致病性禽流感疫情处置技术规范

高致病性禽流感疫情处置技术规范（试行）<br />第一项 样品采集、保存及运输技术规范<br />采集、保存和运输样品应当符合下列要求，并填写采样单。<br />一、样品采集<br />（一）病禽<br />1．至少从 5 只濒死禽采集样品。样品包括：泄殖腔拭子和气管拭子（置<br />于缓冲液中）各 5 个（小珍禽可采集新鲜粪便）；气管和肺的混样 5 个，肠管<br />及内容物的混样 5 个；肝、脾、肾和脑等组织样品（不能混样）各 5 个。<br />2．分别采集至少 10 个病鸡的血样（急性发病期血清）。<br />（二）病死禽<br />无发病禽时，可从死亡不久的病禽采样，采样要求同病禽。<br />棉拭子单独放入容器，容器中盛放含有抗菌素的 pH 值为 7.0-7.4 的 PBS<br />液。抗生素的选择视当地情况而定，组织和气管拭子悬液中加入青霉素<br />（2000IU/mL）、链霉素（2mg/mL）、庆大霉素（50μg/mL）、制霉菌素（10000 <br />IU/mL）。但粪便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提高 5 倍。加入抗生素后 pH<br />值应调至 7.0-7.4。<br />二、样品保存和运输<br />血样要单独存放，不能混合。<br />样品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的容器中运输，容器必须密<br />封，防止渗漏。<br />样品若能在 24 小时内送到实验室，冷藏运输。否则，应冷冻运输。<br />若样品暂时不用，则应冷冻（最好-70℃或以下）保存。<br /> <br /> 采样单<br />样品名称 <br />样品编号 <br />采样基数 采样数量 <br />采样日期 保存情况 冷冻（藏）<br />被采样单<br />位<br /> <br />通讯地址 <br />联系电话 邮编 <br /> <br />被采样单位盖章或签名<br /> <br /> 年 月 日<br />采样单位盖章 采样人签名 <br /> <br /> <br />年 月 日<br />备注：<br /> 此单一式三份，第一联存根，第二联随样品，第三联由被采样单位保存。<br />第二项 血清学诊断技术规范<br /> 一. 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验技术<br />(一)材料准备<br />1. 96 孔 V 型微量反应板，微量移液器（配有滴头）。<br />2. 阿氏（Alsevers）液、鸡红细胞悬液，配制方法见附录 A。<br />3. pH7.2 的 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）。<br /> <br />4. 高致病性禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴性血清。<br /> (二) 操作方法<br />1. 血凝（HA）试验（微量法）<br />（1） 在微量反应板的 1-12 孔均加入 0.025mL PBS，换滴头。<br />（2） 吸取 0.025mL 抗原加入第 l 孔，混匀。<br />（3） 从第 1 孔吸取 0.025mL 抗原加入第 2 孔，混匀后吸取 0.025mL 加<br />入第 3 孔，如此进行对倍稀释至第 11 孔，从第 11 孔吸取 0.025mL 弃之，换<br />滴头。<br />（4） 每孔再加入 0.025mL PBS。<br />（5） 每孔均加入 0.025mL 1%（V/V）鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液<br />充分摇匀后加入）。<br />（6） 振荡混匀，在室温（20℃-25℃）下静置 40min 后观察结果（如果<br />环境温度太高，可置 4℃环境下 1hr）。对照孔红细胞将成明显的钮扣状沉到<br />孔底。<br />（7） 结果判定。将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝<br />（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。<br />2. 血凝抑制（HI）试验（微量法）<br />（1） 根据血凝试验结果配制 4HAU 的病毒抗原。以完全血凝的病毒最<br />高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以 4 即为含 4HAU 的抗原的稀释倍数。<br />例如，如果血凝的终点滴度为 1:256，则 4HAU 抗原的稀释倍数应是 1:64（256<br />除以 4）。<br />（2） 在微量反应板的1-11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。<br /> <br />（3） 吸取 0.025mL 血清加入第 1 孔内，充分混匀后吸 0.025mL 于第 2<br />孔，依次对倍稀释至第 10 孔，从第 10 孔吸取 0.025mL 弃去。<br />（4） 1-11 孔均加入含 4HAU 混匀的病毒抗原液 0.025mL，室温（约 20℃）<br />静置至少 30min。<br />（5） 每孔加入 0.025mL 的鸡红细胞悬液轻轻混匀，静置约 40min（室<br />温约 20℃，若环境温度太高可置 4℃条件下 1hr），对照红细胞将呈显钮扣状<br />沉于孔底。<br />（三）结果判定 <br /> 以完全抑制 4 个 HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为 HI 滴度。<br /> 只有阴性对照孔血清滴度不大于 21og 2，阳性对照孔血清误差不超<br />过 1 个滴度，试验结果才有效。HI 价小于或等于 31og2 判定 ...